在做慢病毒包装实验中，有科研工作者常遇到：用同样的病毒载体系统进行病毒包装实验，为什么有人做的很好，次次成功，有人却是时常做不出来，稳定性很差，不是滴度低就是根本不出毒?
首先我们来简要介绍下慢病毒包装的流程：
影响病毒包装是否成功的因素有很多，例如：细胞因素、载体系统、质粒抽提纯化情况、包装转染控制、目的基因对病毒包装影响等。今天汉恒就把10年的病毒包装经验总结给大家。
- 实验材料的选择
我们进行慢病毒包装实验时要重视包装材料——建议使用商品化的成熟毒载体系统，汉恒生物慢病毒包装体系为三质粒系统：组成为psPAX2, pMD2.G, pHBLVTM系列质粒。包装细胞293T细胞培养时要让它培养时让它“白白胖胖、活力充沛“。并且要定期纯化包装细胞、测序验证表达质粒。
2、目的基因对慢病毒包装的影响
目的基因的大小、序列情况、该目的蛋白的功能毒性等都有可能导致无法包装成功。一般慢病毒包装的目的片段大小在2.5k以内较为合适，大于2.5k会降低病毒包装滴度或超过载体容量无法包装。并且，可能存在一些基因表达翻译后对包装细胞产生毒性，导致细胞状态异常，无法完成病毒包装，这种情况我们可以尝试更换病毒包装系统，例如选择包装腺病毒。
3、载体构建和抽提纯化环节
我们要注意是否构建时导致质粒载体重组或某个部件缺失，或污染别的质粒、杂物?中抽纯化是否污染?要养成同时做阴性对照的习惯：建议目的基因载体和阴性对照GFP 载体是同一批，且建议每次包装都如此操作，要保证目的基因的表达载体构建纯化良好，质粒间比例得当。建议三质粒包装系统质粒转染时的摩尔比为1：1：1。
4、细胞转染及病毒搜集阶段
细胞产毒出毒期间过程中的细胞活力是包装成功及病毒滴度高低的一个重要环节，包装或转染感染前一定要重视细胞干净细微污染与否、饱满立体感是否好、铺板均匀，细胞密度在50-60%时进行包装比较合适。在24、48 小时的要观察细胞及荧光状态，判断是否正常，转染后48h和72h分别两次收集病毒上清(48h收集后置换新鲜培液)。
当然，最重要的是，在进行慢病毒质粒转染293T细胞时，使用汉恒生物慢病毒包装专用转染试剂：LentiFitTM。效率高、毒性低，血清的存在不影响转染效率，让你的细胞在包装慢病毒时“又圆又胖”，大大的提高了慢病毒包装的成功率。