杭州环特生物科技股份有限公司

免疫毒性指标有3个：（1）应用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼，观察中性粒细胞数量；（2）应用转基因巨噬细胞绿色荧光斑马鱼，观察巨噬细胞数量（荧光强度）；（3）注射红色荧光微球，巨噬细胞吞噬微球排出体外

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1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼毛细胞明显减少，与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有听毒性。

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我们可以通过检测斑马鱼的行为来判断斑马鱼是否产生焦虑。同时还可以通过检测焦虑相关基因（如gabra1、gad2、htr2aa基因）相对表达量以及MAO含量来评价斑马鱼是否产生焦虑。

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1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，相对于正常对照组，服用或者注射供试品组之后，中性粒细胞增多和炎症因子上升。2.本实验证实了供试品组等具有增加中性粒细胞数量，以及促进炎性因子表达的作用。

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斑马鱼CRISPR基因编辑技术服务，即斑马鱼基因编辑，包含斑马鱼基因敲除、斑马鱼基因敲入、斑马鱼转基因等品系制备，高效筛选方法，技术成熟，周期短，费用低，数百成功案例见证。

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巨噬细胞是能吞噬和杀灭胞内寄生虫、细菌、肿瘤细胞、以及自身衰老和死亡的细胞，并能发挥机体的免疫防御、免疫自稳、免疫监视功能的抗原递呈细胞。

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根据实验终点斑马鱼的死亡率，通过使用OriginPro 8.0统计学软件，拟合半数致死浓度。

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经过各组斑马鱼的对比实验，摄入供试品组的斑马鱼体内VTG有下降趋势，子一代斑马鱼有致畸性，性腺病理切片有不同程度的异常，与性腺发育和繁殖行为相关基因的上调。本实验证实了该供试品对斑马鱼有生殖毒性。

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服用/注射药物一段时间后，我们观察斑马鱼的运动行为，通过荧光染色观察中枢神经凋亡细胞，也可以利用转基因运动神经绿色荧光NBT品系斑马鱼观察外周运动神经长度。

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服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼整体进行观察评价，观察斑马鱼心脏、脑部、耳、下颌、眼、肝脏、肠道、躯干/尾/脊索、肌肉/体节、鳍、体长、身体着色、循环系统、身体水肿和出血等毒性反应情况，统计毒性

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