磷酸钙转染试剂是一种经典的基因转染工具，它通过形成DNA-磷酸钙共沉淀物，促进细胞通过内吞作用吸收DNA，适用于多种真核细胞的瞬时和稳定转染，以其操作简便、成本低廉、转染效率高而广受欢迎。
基本原理
01
DNA与磷酸钙的结合
在含有磷酸盐的缓冲液（HBS）中，加入氯化钙（CaCl2）溶液和含有目的DNA的溶液。
DNA分子在生理pH条件下带负电荷，而磷酸钙带正电荷，通过静电作用，DNA与磷酸钙结合。
02
形成DNA-磷酸钙共沉淀物
当DNA与磷酸钙混合后，会形成DNA-磷酸钙共沉淀物。这些沉淀物是微小的DNA-磷酸钙复合体，它们可以吸附到细胞表面。03
细胞吸收共沉淀物
将形成的DNA-磷酸钙共沉淀物添加到待转染的细胞培养基中。细胞通过内吞作用吸收这些共沉淀物。04
DNA进入细胞
内吞后的DNA-磷酸钙复合体被包裹在内吞体内，随后内吞体与溶酶体融合，DNA被释放到细胞质中。05
DNA的表达
释放到细胞质中的DNA可以通过细胞的核孔复合体进入细胞核，进行蛋白表达。
翌圣生物的磷酸钙法细胞转染试剂，基于传统方法优化，提高转染效率，减少细胞毒性，特别适合HEK293、293T和Hela等细胞系。适用于瞬时和稳定转染，即开即用，操作简便。
产品特点
02
·
性能稳定：可在2-8℃保存，有效期2年；
·
转染效率高：在293T细胞上阳性率高达95%；
·
毒性低：对细胞基本无毒，转染后不影响细胞正常生长。
·
结果展示
03
6孔板中，使用翌圣磷酸钙法细胞转染试剂在293T细胞上转染GFP质粒， 按照转染试剂说明书进行操作；转染48 h后，荧光倒置显微镜下观察并拍照。结果显示，翌圣磷酸钙法细胞转染试剂在293T细胞上的转染效率高达95%以上。
操作方法
04 01
按照60％左右的密度种植细胞入培养皿（瓶），细胞贴壁生长12-24小时后即可准备转染；
02
准备1.5 mL离心管，按照下表指示，依次加入DNA、HBS和CaCl2；
03 振荡混匀后室温静置15分钟；04
吹打3－5 次后均匀加到待转染细胞的培养液中，轻轻摇动培养皿（瓶）；
05 放置37℃，5%CO2培养箱中进行细胞培养；06 转染6小时后换液；07 24-48小时检测目的蛋白质的表达。
不同培养容器试剂使用量（仅供参考）
|
细胞培养试剂 |
6孔板 |
T-25培养瓶 |
10 cm平皿 |
|
培养基（mL） |
2 |
5 |
10 |
|
DNA（μg） |
2 |
4 |
7.5 |
|
HBS（mL） |
0.2 |
0.5 |
1 |
|
CaCl2（μL） |
14 |
35 |
70 |
产品信息
05
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产品名称 |
产品规格 |
产品货号 |
|
Hieff Trans®Calcium Phosphate Cell Transfection Kit 磷酸钙法细胞转染试剂 |
200T |
40803ES70 |
相关产品
06
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产品名称 |
产品规格 |
产品货号 |
|
100 μL/1 mL |
40802ES01/40802ES03 |
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|
500 μL/5×500 μL |
40804ES76/40804ES86 |
|
|
Hieff Trans® Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent转染试剂 |
100 μL/1 mL |
40805ES01/40805ES03 |
|
100μL/1mL |
40806ES01/40806ES03 |
|
|
0.5 mL /1 mL |
40808ES02/40808ES03 |
|
|
100μL/1mL |
40809ES01/40809ES03 |
|
|
1.5 mL /10 mL /100 mL |
40820ES04/40820ES10 /40820ES60 |
|
|
10 mL /100 mL/1L |
40821ES10/40821ES60 /40821ES80 |
|
|
1 mL /10 mL /100mL |
40823ES03/40823ES10 /40823ES60 |