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快速转印低、中、高分子量蛋白的理想选择

作者:南京厚百生物科技有限公司 2015-01-20T00:00 (访问量:1883)

Pierce G2 Fast Blotter转印系统以其快速,高效的蛋白转印效率深受实验室推崇。下面来看看这套仪器是用什么方法做到快速转膜的。

转膜前首先梯度稀释HeLa 细胞裂解液,SDS-PAGE 凝胶电泳后使用以下方法进行转膜:

1.   Pierce G2 Fast Blotter10 分钟);
 
2.   Trans-Blot Turbo 半干转系统(10 分钟);
 
3.   iBlot Transfer(7 分钟);
 
4.   传统半干转膜仪(恒压 25V,60 分钟),使用 Towbin Transfer Buffer(25 mM Tris、139 mM 甘氨酸、20% 甲醇)及适当的滤纸和膜(恒压 25V,1小时);
 
5.   传统湿转(恒压 30V,16 小时)。
 
随后将膜三等分。使用 anti-mTOR Antibody(Pierce货号 PA1-518)检测膜的顶部,使用 anti-PLK-1 Antibody
(pierce货号MA1-848)检测膜的中间部分,使用 anti-Cyclophilin B Antibody(Pierce货号 PA1-027A)检测膜的底
部。

使用 SuperSignal West Dura Kits(Pierce货号 35075)对膜进行后续处理。

利用 Thermo Scientific MYECL Imager 获取发光图像,在 Thermo Scientific MYImageAnalysis 软件上对光密度
定量。

 下面是转印效果:

分子量范围

凝胶类型

目标蛋白及其分子量

Pierce G2 Fast Blotter(10分钟)

Trans-Blot Terbo(10分钟)

Iblot Transfer(7分钟)

传统半干转(1小时)

传统湿转(过夜)

 
 相对于传统方式,需要1小时甚至过夜转印才能保证有效的蛋白转移,使用本转印系统仅需5-10分钟就可以达到相同的蛋白转印效果。可以说 Pierce G2 Fast Blotter转印系统是快速转印低、中、高分子量蛋白的理想选择。
 
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